西尼羅河病毒IgG、IgM聯合診斷試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

檢查

1.實驗室檢查

白細胞數減少，腦炎型者腦脊液中淋巴細胞增多，蛋白增高。

2.免疫學檢查

利用血清學抗體檢測方法，常用ELISA（酶聯免疫吸附實驗）法，采用患者急性期和恢復期雙份血清，兩份血清同時進行檢測，以恢復期血清較急性期特異性IgG抗體滴度升高4倍以上為陽性，有助于本病的診斷。

3.病原學檢查

自潛伏末期至發(fā)病后第5天，從患者血液或腦脊液中分離出病毒，陽性率較高，對新分離病毒的鑒定一般采用已知血清進行中和實驗。

4.分子生物學檢查

RT-PCR（逆轉錄-聚合酶鏈反應）法檢測，通過設計西尼羅河熱病毒特異引物對血清或腦脊液標本進行RT-PCR試驗，陽性率高，具有特異性診斷價值。

用途

西尼羅(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼羅重組抗原檢測人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實驗僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒，不用于篩查血液或血液成分。僅供專業(yè)人員體外診斷使用。

概述

 感染了西尼羅病毒會導致包括腦炎等一系列癥狀的疾病，西尼羅病毒在世界廣泛傳播，已在50多個國家檢測出該病毒。本試驗經CDC提供的試劑檢驗與驗證。本試驗使用了一種稱為WNRA的重組抗原，它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學指標，WNRA蛋白是一種重組抗原，它是由含有西尼羅病毒兩個抗原的序列多肽構成。

實驗的原理

檢測西尼羅病毒IgG ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。

提供的材料

• 微孔板（96孔 12x8）：即用  每孔均包被結合西尼羅重組抗原的單抗。2－8℃下保存至保質期。

注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。

• IgG樣品稀釋液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
• IgG陰性質控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。
• IgG陽性質控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。
• 洗滌液（10X）：1瓶 120ml  2－8℃下保存至使用。
• EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。
• 酶聯物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
• TMB底物液： 1支 9ml 即用  2－8℃下保存至使用。
• 終止液；1支6ml 即用  2－8℃下保存至使用。

試劑應避免反復凍融。

西尼羅河病毒IgG、IgM聯合診斷試劑盒

操作步驟：

• 標記將要使用的板條，注意微孔板已經按照統一排列，如下所述包被西尼羅抗原和質控抗原。

• 將血清樣品﹑陰性質控和陽性質控同樣地用樣每孔加入50ul稀釋后的樣品，以下為一個血清樣品使用一個板條的*。
• 品稀釋液按1：300稀釋。

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新合成的蛋白質可以用放射  免疫測定Western印跡，體內代謝標記－免疫沉淀或者細胞  提取液中酶活性的測定等方法來進行分析，如果測定中有  重復品或者轉染細胞要經過多種不同條件或在一段時間歷  程以內取不同時間進行處理，就要避免皿與培養(yǎng)皿之間轉  染效率的偏差。在這些情況下，轉染大片的單層細胞  （90mm培養(yǎng)皿），培養(yǎng)24h后用胰蛋白酶進行消化，再分接  到若干較小的培養(yǎng)皿上。②穩(wěn)定轉化：在非選擇性培養(yǎng)基  中培養(yǎng)18～24h，使所轉移基因得到表達之后，用胰蛋白酶  消化細胞，種入適當的選擇性培養(yǎng)基中。這種培養(yǎng)基在2～  3周內每2～4d須更換1次，以便除細胞殘骸并使抗性細胞集  落得以生長。可以克隆單個細胞集落，增殖后進行測定。  可以用冰預冷的甲醇將仍保留在培養(yǎng)皿內的細胞固定15min  ，再于室溫用10%Giemsa染色15min，zui后用自來水沖洗，  這樣即可得到細胞集落數的*記錄。Giemsa染液可用PBS  或水現用現配，并用Whatman 1號濾紙過濾。重新接種細胞  以便取得分隔良好的細胞集落所要求稀釋倍數，主要由穩(wěn)  定轉化的效率來決定。